ABSTRACT Q fever is a worldwide zoonosis caused by Coxiella burnetii—a small obligate intracellular Gram-negative bacterium found in a variety of animals. It is transmitted to humans by inhalation of contaminated aerosols from urine, feces, milk, amniotic fluid, placenta, abortion products, wool, and rarely by ingestion of raw milk from infected animals. Nested PCR can improve the sensitivity and specificity of testing while offering a suitable amplicon size for sequencing. Serial dilutions were performed tenfold to test the limit of detection, and the result was 10× detection of C. burnetti DNA with internal nested PCR primers relative to trans-PCR. Different biological samples were tested and identified only in nested PCR. This demonstrates the efficiency and effectiveness of the primers. Of the 19 samples, which amplify the partial sequence of C. burnetii, 12 were positive by conventional PCR and nested PCR. Seven samples—five spleen tissue samples from rodents and two tick samples—were only positive in nested PCR. With these new internal primers for trans-PCR, we demonstrate that our nested PCR assay for C. burnetii can achieve better results than conventional PCR.

Bartonella henselae está associada a um amplo espectro de manifestações clínicas, incluindo a doença da arranhadura de gato, endocardite, e meningoencefalite, em pacientes imunocompetentes e imunocomprometidos. Relatamos o primeiro caso confirmado por método molecular de B. henselae em um paciente com SIDA no estado do Rio de Janeiro, Brasil. Apesar da sequência de DNA de B. henselae ser detectada pela reação em cadeia da polimerase em uma biópsia do linfonodo, soros das fases aguda e convalescente foram não reativos.

Bartonella henselae is associated with a wide spectrum of clinical manifestations, including cat scratch disease, endocarditis and meningoencephalitis, in immunocompetent and immunocompromised patients. We report the first molecularly confirmed case of B. henselae infection in an AIDS patient in state of Rio de Janeiro, Brazil. Although DNA sequence of B. henselae has been detected by polymerase chain reaction in a lymph node biopsy, acute and convalescent sera were nonreactive.

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma zoonose causada por Rickettsia rickettsii e transmitida por carrapatos do gênero Amblyomma, mais freqüentemente pela espécie Amblyomma cajennense. Este trabalho tem como objetivo relatar a primeira detecção molecular de R. rickettsii em Rhipicephalus sanguineus naturalmente infectado no Rio de Janeiro, Brasil. Carrapatos foram coletados de cães, procedentes de uma região rural do município de Resende, estado do Rio de Janeiro, Brasil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), onde ocorreram cinco casos humanos de FMB em 2006. Todos os carrapatos foram identificados segundo chave dicotômica, utilizando-se lupa estereoscópica e separados de acordo com estágio, espécie e sexo. Para a extração de DNA utilizou-se o kit comercial QIAamp DNA (QIAGEN ®). O DNA foi submetido à técnica de PCR utilizando 04 conjuntos de iniciadores para a amplificação dos genes: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa gene que codifica a proteína, 246bp) e RPCs .877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). Os produtos da PCR foram separados por eletroforese em gel agarose 1% corados com brometo de etídio e visualizados sob luz ultravioleta e, aqueles que apresentaram bandas amplificadas foram purificados utilizando-se o kit comercial QIAquick ® e seqüenciados pelo ABI PRISM®. As seqüências nucleotídicas foram geradas usando Bioedit®, editado em software e comparados os correspondentes homólogos com as sequências disponíveis através GenBank, utilizando Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Confirmou-se R. rickettsii (GenBank FJ356230) no seqüenciamento de apenas um espécime, adulto de carrapato R. sanguineus. A caracterização molecular de R. rickettsii em exemplar de carrapato R. sanguineus confirma que esta espécie pode ter importante papel na transmissão de R. rickettsii para humanos no território brasileiro.

The Brazilian Spotted Fever (BSF) is a zoonotic disease caused by Rickettsia rickettsii and transmitted by ticks of the genus Amblyomma, more frequently, Amblyomma cajennense. The aim of this paper was to report the first molecular detection of R. rickettsii on R. sanguineus naturally infected in Rio de Janeiro, Brazil. Ticks were collected from dogs in a rural region of Resende municipality, Rio de Janeiro State, Brazil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), where occurred five human cases of BSF in 2006. The ticks were identified under a stereoscopic microscope and separated in pools by stages, species and sex. DNA extraction was carried out using QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN®). The DNA was submitted to PCR amplification using 04 set of primers: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa protein-encoding gene, 246bp) and RpCS.877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). PCR products were separated by electrophoresis on 1% agarose gels and visualized under ultraviolet light with ethidium bromide. PCR products of the expected sizes were purified by QIAquick® and sequenced by ABI PRISM®. The generated nucleotide sequences were edited with using Bioedit® software and compared with the corresponding homologous sequences available through GenBank, using Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). It was confirmed R. rickettsii by sequencing of the material (GenBank FJ356230). The molecular characterization of R. rickettsii in the tick R. sanguineus emphasizes the role of dogs as carriers of ticks from the environment to home. Moreover, this result suggests that there is a considerable chance for active participation of R. sanguineus as one of tick species in the transmission of R. ricketsii to human being in the Brazilian territory.

Carrapatos de vegetação e de animais foram coletados mensalmente durante o período de um ano (1993-1994) em uma área endêmica de febre maculosa brasileira no município de Pedreira, São Paulo. Seis espécies de carrapatos foram identificadas Amblyomma cajennense, Amblyomma cooperi, Amblyomma triste, Anocentor nitens, Rhipicephalus sanguineus e Boophilus microplus. Somente a primeira espécie foi suficientemente abundante para permitir um estudo quantitativo com atividade sazonal, embora a distribuição e fonte de captura de outras espécies fossem observadas e aqui relatadas. Estas informações são correlacionadas com a epidemiologia da rickettsiose transmitida por carrapato.

Ticks were collected from vegetation and animals at monthly intervals during one year (1993-1994) in an endemic area of Brazilian spotted fever in the County of Pedreira, State of São Paulo. Six species of ticks were identified Amblyomma cajennense, Amblyomma cooperi, Amblyomma triste, Anocentor nitens, Rhipicephalus sanguineus and Boophilus microplus. Only the first species was sufficiently numerous to permit a quantitative study with seasonal activity, although the distribution and source of capture of other species were observed and are reported. This information is correlated with the epidemiology of tick-borne rickettsiosis.

Com o objetivo de obter informações sobre a febre maculosa brasileira, um estudo em animais domésticos foi conduzido no município de Pedreira, São Paulo, Brasil, onde 17 casos humanos foram notificados. Amostras de soro obtidas de animais foram testadas pelo teste de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos para rickettsia do grupo da febre maculosa. Soro reatividade foi observada em 12 (36,4%) dos 33 cães e sete (77,8%) dos nove eqüinos procedentes da área endêmica. Para comparação, amostras de sangue de cães e de eqüinos procedentes de área não endêmica foram testadas e quatro (12,9%) dos 31 cães e três dos 10 eqüinos foram positivos. Somente três cães e seis eqüinos procedentes da área endêmica tinham títulos de anticorpos imunofluorescentes elevados (> 1:1024). Os resultados obtidos sugerem que além dos cães, os eqüinos poderiam servir também como animal sentinela na febre maculosa brasileira

In order to obtain information on Brazilian spotted fever, a study in domestic animals was performed in the County of Pedreira, State of São Paulo, Brazil, where 17 human cases had been notified. Serum samples obtained from animals were tested by indirect immunofluorescence for detectable antibodies to spotted fever-group rickettsiae. Seropositivity was revealed in 12 (36.4%) of 33 dogs and seven (77.8%) of nine horses from the endemic area. For comparison, blood samples from dogs and horses from non endemic area were tested and four (12.9%) of 31 dogs and three (27.3%) of 11 horses were positive. The highest titers of antibodies by IFA (IgG > 1:1024) were found only in three dogs and six horses from endemic area. The results suggest that dogs as horses may serve as environmental sentinels for estabilishing the prevalence of foci of spotted fever in Brazil.